Методика определения групп крови
Простая реакция
Принадлежность группы крови проводится при комнатной температуре: +15..25°C. На маркированной тарелке белого цвета записывается фамилия лица, у которого производится определение. Затем на эту же тарелку наносится по 2 капли стандартных сывороток (каждая сыворотка наносится своей пипеткой) групп Oαβ(I), Aβ(II), Bα(III) двух серий (расстояние между каплями не менее 5 см).
Справа от капель сывороток помещаются капля исследуемой крови, которая должна быть в 5-10 раз меньше капель сывороток.
Кровь перемешивают с сыворотками. Делают это стеклянной палочкой или одним и тем же углом предметного стекла. После каждого перемешивания палочка (стекло) промывается в воде и вытирается насухо.
За ходом реакции наблюдают в течение 5 минут, периодически покачивая тарелку.
В те капли, где к 3-й минуте наблюдения произошла агглютинация, вводят по 1 капле физраствора (чтобы дифференцировать псевдоагглютинацию), после чего еще наблюдают 2 минуты.
Результат оценивается по наличию агглютинации по истечении 5 минут наблюдения:
- кровь Oαβ(I) группы - со стандартными сыворотками агглютинации не наступило;
- кровь Aβ(II) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Bα(III), и не наступила с сывороткой Aβ(II);
- кровь Bα(III) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Aβ(II), и не наступила с сывороткой Bα(III);
- наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками еще не позволяет отнести кровь к ABO(IV) группе, т.к. возможна панагглютинация. В таком случае на тарелку наносится 2 капли стандартной сыворотки ABO(IV) группы и добавляется к ним капля исследуемой крови - если через 5 минут агглютинации не произошло, то кровь относят к ABO(IV) группе.
Двойная реакция
Кровь для исследования берется и вены в объеме 5 мл в чистую сухую пробирку без добавления цитрата, чтобы можно было получить отдельно сыворотку и эритроциты.
Кроме стандартных сывороток берутся стандартные эритроциты групп, которые готовятся в специальных учреждениях службы крови.
Тарелка делится на две части горизонтальной линией. В верхней части ведется исследование стандартными сыворотками с исследуемыми эритроцитами; в нижней части - стандартными эритроцитами с исследуемой сывороткой.
По истечении 5 минут производится оценка и делается заключение о группе крови.
Определение групп крови моноклинальными антителами
Моноклинальные антитела (ABO-титрующие: цоликлоны анти-А и анти-В) получаются при помощи генной инженерии. Их готовят в промышленных масштабах из крови стерильных мышей, поэтому исключается заражение гепатитом или СПИДом. Цоликлон анти-А окрашивается в голубой цвет; анти-В - в розовый.
Цоликлоны наносятся на планшет одной большой каплей (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А, анти-В. Рядом наносится по одной маленькой (0,01 мл) капле исследуемой крови. После смешивания реагентов и крови реакцию агглютинации наблюдают в течение 2,5 минут.
Оценка результатов:
- кровь Oαβ(I) группы - агглютинации нет ни с цоликлоном анти-A, ни с анти-B (эритроциты не содержат антигенов A и В);
- кровь Aβ(II) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-A (эритроциты содержат только антиген A);
- кровь Bα(III) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-B (эритроциты содержат только антиген B);
- кровь ABO(IV) - агглютинация наблюдается с обеими цоликлонами (эритроциты содержат оба антигена). В этом случае производится контрольное исследование дабы исключить аутоагглютинацию. Одна капля (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия смешивается с каплей (0,01 мл) исследуемой крови - реакция агглютинации должна отсутствовать.
ВНИМАНИЕ! Информация, представленная сайте DIABET-GIPERTONIA.RU носит справочный характер. Администрация сайта не несет ответственности за возможные негативные последствия в случае приема каких-либо лекарств или процедур без назначения врача!